生物素蛋白连接酶

生物素蛋白连接酶(EC 6.3.4.15)活化生物素形成生物酰5'腺苷酸，再将生物素转移到生物素受体蛋白上。
它是生物素的操纵子的抑制物，由birA基因编码.

它的别称如下：生物素连接酶；生物素操纵子阻碍蛋白；birA；生物素全酶合成酶；
生物素乙酰辅酶A合成酶。

来源：E.coli.

储存缓冲液：50 mM咪唑，pH 6.8, 50 mM 氯化钠, 50% 甘油, 5 mM 巯基乙醇.

储存条件： 于干冰中运送，到达后要立刻置于-80°C中。解冻后分装，近期使用可保存于4°C，长时间的使用需保存于在-80°C并充入液氮。

混合液A和B可以储存在-20°C。即使出现融化与结冰混合物的情况也不影响使用。

稳定性： 在4°C中，可以保持大于90%生物素连接酶活性超过三个月。

浓度： 在A280下1.0 mg/mL。

纯度： 经考马斯亮蓝染色测定，纯度大于98%。

酶活性: 5,000 Units/µg

酶活单位定义： 在30°C 下，1单位酶可以在30分钟内将含有38μM 多肽底物的反应液中 1 pmol 多肽底物生物素化*。
* 在酶分析中使用的多肽底物的序列是根据Schatz#85版本的15个氨基酸。

含有蛋白酶：糜蛋白酶类活性<0.01%。

使用说明:

试剂盒组成:

• 混合物A（10倍浓度：0.5 M N,N-二羟乙基甘氨酸缓冲液，pH 8.3)
• 混合物B（10倍浓度：100 mM ATP, 100 mM MgOAc, 500 μM d-生物素)
• 生物素蛋白连接酶
• 额外的d-生物素

最终反应液应含有以下成分：1份的混合物A，1份的混合物B和8份的底物.

加入反应液中生物素连接酶的量应该根据时间范围不同而有所不同。例如，在30°C下，反应时间为30-40分钟，每10 nmol底物（浓度为40 μM）加入生物素连接酶2.5 μg，可完成整个生物素化。

值得注意的是许多在生物缓冲液常见的成分可能会抑制生物素连接酶，其中包括氯化钠（100mM），甘油（5%）和硫酸铵（50mM）。因此，这些试剂的浓度应尽量减至最低。如有可能，最好将这些试剂与10 mM pH 8 Tris-HCl一起使用。

为了保证快速完成生物素化，最好使用高浓度的底物（达到40μM），因为底物浓度越低，生物素化所需要的时间越长。例如，使用同样量的生物素连接酶，40 μM底物可以在30分钟内完成生物素化，而4μM底物则需时5小时，如果4μM底物要在30分钟内完成生物素化，需要加入10倍的酶。

反应混合物A和B已经针对生物素化反应进行优化，其底物浓度不超过40μM。如果底物浓度达40μM-80μM，则要加入额外的生物素，反应混合物比例如下：1份混合物A，1份混合物B，7份底物，一份额外的生物素。如果底物浓度超过80μM，请与技术人员联系。以上所述的反应条件已经经过优化，采用的多肽来源于Schatz的85号的15个氨基酸序列。我们同样对以生物素标签的蛋白作为底物的反应进行条件优化，发现和多肽底物的反应条件一致。