miArrest™基于载体表达的和化学合成的miRNA抑制剂 — 有效抑制miRNA的功能

miArrest™ miRNA抑制剂可特异、高效地抑制生物体内源性miRNA的活性，是研究miRNA功能的必要工具。复能基因提供针对miRBase数据库中全部人、小鼠和大鼠miRNAs 的特异性抑制剂。

1048条人源   ·   672条小鼠源   ·   408条大鼠源

基于载体的miRNA抑制剂表达克隆

复能基因提供基于慢病毒或非病毒的miRNA抑制剂表达载体，采用H1或者U6启动子驱动miRNA抑制剂的转录，以保证能在大多数哺乳动物细胞中高水平表达。载体表达的miRNA 抑制剂特异、稳定地结合细胞内成熟的靶miRNA，阻止miRNA介导的靶标mRNA的降解或者翻译抑制。miRNA抑制剂克隆可转（感染）染细胞进行瞬时抑制或者稳定抑制。

根据您的实验需求选择合适的表达载体：

基于HIV的慢病毒miRNA抑制剂表达载体	非病毒的miRNA抑制剂表达载体

miRNA 抑制剂克隆的特点:

多样    即有慢病毒表达载体又有非病毒表达载体

方便    易于导入非分裂的和难转染的细胞；载体带有荧光蛋白报告基因便于转(感)染后的细胞筛选。

高效    与LNA修饰的或者其他类型化学合成的miRNA抑制剂相比具有更强、更长久的抑制效力和极低的细胞毒性。(参看表格1中的标记)

优质    miRNA抑制剂表达框按专有的算法设计并经过严格的实验测试

表 1. 基于载体表达的和化学合成的miRNA抑制剂的比较

miRNA inhibitor 克隆的作用机制

miRNA 抑制剂克隆导入细胞后表达的miRNA抑制剂(miArrest)特异地结合它们的靶miRNA。miRNA抑制剂转录后折叠形成一个稳定的陷阱结构，暴露出两个可以捕捉、结合靶 miRNA的环。一分子的miArrest可结合两分子靶miRNA。miArrest高效、特异地结合细胞内成熟的靶miRNA，形成稳定的复合物，阻止了miRNA对靶标mRNA的降解或者翻译抑制，上 调miRNA靶标基因的表达（图1）。

独特的载体设计确保最大程度抑制强度、抑制剂持久性和特异性，同时将脱靶效应降至最低。

Figure 1. Simplified mechanism of action for vector-based miRNA inhibitors

图 2. miArrest miRNA抑制剂克隆以剂量-依赖的方式抑制靶miRNA HEK293细胞中共转染miR-125a 抑制剂表达质粒 (GeneCopoeia HmiR-AN0094-AM01) 、miR-125a 前体表达质粒(GeneCopoeia HmiR0309-MR03) 和miR-125a的靶标LIN28 3’-UTR报 告质粒(GeneCopoeia HmiT019205-MT02：LIN28 的3’-UTR克隆到Gaussia 荧光素酶-碱性磷酸酶双报告载体)。转染24小时后检测报告基因Gaussia 荧光素酶和参照基因碱性磷酸 酶的活性。单转染靶标Gluc-LIN28-3’-UTR报告质粒的细胞中Gaussia 荧光素酶与碱性磷酸酶活性比值设为1 (左数第一条柱)，用来标准化其他细胞样品中的报告基因活性。结 果表明miR-125a抑制Gluc-LIN28-3’-UTR 的活性达70%之多（左数第二条柱）。这种抑制效应可被导入的miR-125a抑制剂表达质粒以剂量依赖的方式特异性的阻遏。转染100 ng 抑制剂表达质粒时，细胞内报告基因/参照基因活性比值已超出单独转染Gluc-LIN28-3’-UTR报告质粒的对照组（右数第一条）。这说明高效的miR-125a抑制剂阻遏掉外源共转染 的miR-125a的同时也阻遏了细胞中内源性的miR-125a对靶标报告基因的抑制，提高了GLuc-LIN28-3’-UTR转录本的稳定性和翻译水平。

化学合成的miRNA抑制剂

化学合成的miRNA抑制剂是序列特定的、单链寡核苷酸分子，适合瞬时转染。优化设计合成的miRNA抑制剂能够特异、高效地结合成熟的靶miRNA，阻止miRNA对靶基因的下调。

化学合成的miRNA抑制剂的特点

• 现货供应所有人、小鼠、大鼠miRNAs的抑制剂
• 化学修饰以提高抑制效力和持久性
• 便于化学转染和电转转染

图3. 化学合成的miRNA抑制剂以剂量-依赖的方式抑制靶miRNA HEK293细胞中共转染不同剂量的化学合成的miR-125a抑制剂 (GeneCopoeia HmiR-AN0094-SN) 、miR-125a 前体表达质粒(GeneCopoeia HmiR0309-MR03) 和miR-125a的靶标LIN28 3’-UTR报告质粒(GeneCopoeia HmiT019205-MT01：LIN28 的3’-UTR克隆到萤火虫荧光素酶-海肾荧光素酶双报告载体)。转染24小时后检测报告基因萤火虫荧光素酶和参照基因 海肾荧光素酶活性。单转染靶标Fluc-LIN28-3’-UTR报告质粒的细胞中萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶活性比值设为1 (左数第一条柱)，用来标准化其他细胞样品中的报告基因 活性。结果表明miR-125a抑制Fluc-LIN28-3’-UTR 的活性达60%以上（左数第二条柱）。这种抑制效应可被导入的化学合成的miR-125a抑制剂以剂量依赖的方式特异性的阻遏（ 左数第4，5，6条柱）。

基于载体表达的或化学合成的miRNA抑制剂的应用

• 用于miRNA功能缺失研究，揭示miRNA的功能
• 用于miRNA的靶标鉴定和确认
• 用于阐明miRNA在细胞生物学过程、生理病理途径中所起的所用，包括细胞分化、多能干细胞的形成、肿瘤发生及免疫应答等。
• 用于医疗诊断类生物标识物和药物靶标的鉴定及确认。

和以下产品一起完善您的miRNA功能研究

• miRNA前体表达克隆，既有慢病毒载体又有非病毒载体。
• miRNA靶标3’-UTR克隆，既有单荧光素酶载体又有双荧光素酶载体。
• miRNA SYBR Green qRT-PCR 检测试剂盒和确证的qPCR引物，用于实时定量检测。