GLuc-ON™ 启动子报告克隆

GLuc-ON™ 启动子克隆采用分泌型的Gaussia荧光素酶（GLuc）作为报告子，可在活细胞中对超过20,000种人源和18,000种小鼠启动子进行实时活性分析。

可直接用于细胞转染的GLuc-ON™ 启动子克隆在GLuc报告基因上游插入一段1.2-1.5 kb的序列。这段插入序列与位于特异人源基因转录起始区上游大约1.5kb到下游200bp之间的5'序列一致。由于这段模拟的顺式作用元件存在于克隆的启动子区域内，我们可以通过观察荧光素酶的活性来研究人源细胞中启动子对基因的调节作用。

美国GeneCopoeia可提供已构建好的GLuc-ON启动子克隆，同时可提供客户定制构建服务。我们既可以提供单报告基因载体系统，也可提供双报告基因载体系统。单报告基因载体系统以Gluc或GFP作为启动子报告基因；双报告基因载体系统以Gluc作为启动子报告基因，以分泌型碱性磷酸酶（SEAP）作为信号标准化的内参。

图1. GLuc-ON™ 启动子克隆工作流程

优势

Gaussia 荧光素酶

GLuc-ON™启动子克隆采用经过修饰的GLuc（mGLuc）作为报告基因，能产生强烈且稳定的荧光信号，克服了人源野生型GLuc（wtGLuc）信号衰退快等缺点。

图2. mGLuc (蓝色) 和 wtGLuc (红色)的信号稳定性。左侧：含有稳定剂的分析缓冲液；右侧：常规分析缓冲液。

双报告系统

双报告系统也适用于GLuc-ON™ 启动子克隆。分泌型碱性磷酸酶（SEAP）作为第二个报告子可作为内参，也能对多样本常规转染进行精确比较。

图3. 启动子在H1B1B 和 HEK293T细胞中的活性分析。双报告基因启动子克隆或对照一式两份转染进两种细胞中。转染24小时（(HEK293T）和48小时（H1B1B）后分析样品。NEG（包含非启动子序列）和EMPTY（载体不含启动子）作为阴性对照。